江(jiang)蘇恒敏(min)儀器冷凍干燥(zao)機主(zhu)要(yao)部件(jian)分為干燥箱、凝結(jie)器、冷凍機組、真空泵、加(jia)熱/冷卻(que)裝置等。凍干機起源于19世紀20年代的(de)真空冷凍干燥(zao)技術(shu)，后真空凍干技術(shu)除了在醫藥上有著廣泛(fan)應用(yong)(yong)，在生物(wu)制(zhi)品(pin)、食品(pin)、血液制(zhi)品(pin)、活性(xing)物(wu)質領域(yu)(yu)之(zhi)外的(de)領域(yu)(yu)也(ye)發揮了重要作(zuo)用(yong)(yong)。下面(mian)小編為大家介紹下微生物(wu)菌(jun)種的(de)冷凍干燥(zao)保藏操作(zuo)流程：
 凍干機適用于(yu)大多(duo)數細菌(jun)、放(fang)線菌(jun)、病(bing)毒、噬菌(jun)體(ti)、立克次體(ti)、霉(mei)菌(jun)和酵(jiao)母等(deng)的(de)真空(kong)冷凍干燥(zao)保藏，但不適于(yu)霉(mei)菌(jun)的(de)菌(jun)絲型、菇(gu)類(lei)、藻類(lei)和原蟲等(deng)。其操作流(liu)程如下(xia)：
 1、安瓿管(guan)準備
 安瓿管(guan)材料以中(zhong)性玻璃(li)為宜。清洗(xi)安瓿管(guan)時，先(xian)用2%鹽(yan)酸浸泡過夜，自來(lai)水沖洗(xi)干(gan)凈后(hou)，用蒸(zheng)餾水浸泡至(zhi)pH中(zhong)性，干(gan)燥(zao)后(hou)、貼上(shang)標(biao)簽，標(biao)上(shang)菌(jun)號(hao)及時間，加入脫脂(zhi)棉塞后(hou)，121℃下高壓滅菌(jun)15-20分鐘，備(bei)用。
 2、保護劑(ji)的(de)選擇(ze)和準備(bei)
 保護劑種(zhong)類要(yao)根據微生物類別選(xuan)擇。配制(zhi)保護劑時(shi)，應注意其濃度(du)及pH值，以(yi)及滅菌(jun)方法(fa)。如血清，可用(yong)過(guo)濾滅菌(jun)；牛奶要(yao)先脫脂(zhi)，用(yong)離心方法(fa)去除上層油(you)脂(zhi)，一般在100℃間歇煮沸2-3次，每次10-30分鐘，備用(yong)。
 3、凍干樣品(pin)的準備
 在適宜的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)條(tiao)件(jian)下(xia)將(jiang)細(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)至靜止期或成熟期，進(jin)行純度檢查后(hou)(參見科技部(bu)自(zi)然(ran)科技資源平(ping)臺聯(lian)合管(guan)(guan)理辦公室(shi)文件(jian)《微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)菌種(zhong)純度檢測(ce)技術規程(cheng)》(試行))，與(yu)保(bao)護劑(ji)混合均勻，分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)。微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)濃度以細(xi)胞(bao)或孢子不少(shao)于108-1010個/ml為宜(以大(da)腸桿菌為例，為了取得每毫(hao)(hao)升(sheng)(sheng)1010個活(huo)細(xi)胞(bao)菌液2毫(hao)(hao)升(sheng)(sheng)-2.5毫(hao)(hao)升(sheng)(sheng)，只需(xu)10毫(hao)(hao)升(sheng)(sheng)瓊脂斜面兩支)。采用(yong)較長的(de)毛細(xi)滴(di)管(guan)(guan)，直接(jie)滴(di)入安(an)瓿管(guan)(guan)底(di)部(bu)，注(zhu)意不要(yao)濺污上部(bu)管(guan)(guan)壁，每管(guan)(guan)分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)量約0.1-0.2毫(hao)(hao)升(sheng)(sheng)，若是球(qiu)形安(an)瓿管(guan)(guan)，裝(zhuang)量為半個球(qiu)部(bu)。若是液體培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)的(de)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)，應(ying)(ying)離(li)心去除培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基，然(ran)后(hou)將(jiang)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)與(yu)保(bao)護劑(ji)混勻，再分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)于安(an)瓿管(guan)(guan)中。分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)安(an)瓿管(guan)(guan)時間盡量要(yao)短，在1-2小時內分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)完畢并預凍(dong)。分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)時應(ying)(ying)注(zhu)意在無菌條(tiao)件(jian)下(xia)操作。
 4、預凍
 一般預凍2小(xiao)時以上，溫度達到(dao)-20℃到(dao)-35℃左右。
 5、冷凍干燥
 采用凍(dong)(dong)干(gan)機進(jin)行(xing)冷(leng)凍(dong)(dong)干(gan)燥。將冷(leng)凍(dong)(dong)后的樣品(pin)安(an)瓿(bu)管(guan)置(zhi)于冷(leng)凍(dong)(dong)干(gan)燥機的干(gan)燥箱內(nei)，開始(shi)冷(leng)凍(dong)(dong)干(gan)燥，時(shi)間一(yi)般為8-20小(xiao)時(shi)。
 終止干燥時間應根據下列(lie)情況判斷：
 安瓿管(guan)內(nei)凍(dong)干物呈酥塊(kuai)狀或松散片狀；
 真(zhen)空(kong)度接近空(kong)載時的(de)最高值(zhi)；
 樣品溫度(du)與管(guan)外(wai)溫度(du)接(jie)近；
 選用1-2支對照(zhao)管，其水份(fen)與(yu)菌懸液同量，視為干(gan)燥完結(jie)；
 選用一個安瓿管(guan)，裝(zhuang)1-2%氯化鈷，如變深蘭色，可(ke)視為干燥完結；
 冷(leng)凍干燥(zao)完(wan)畢后，取出樣品安瓿管置于干燥(zao)器內，備用。
 6、真空(kong)封口及真空(kong)檢驗
 將安瓿(bu)管(guan)頸(jing)(jing)部(bu)用強火焰拉細，然后采用真空(kong)泵(beng)抽(chou)真空(kong)，在真空(kong)條件(jian)下(xia)將安瓿(bu)管(guan)頸(jing)(jing)部(bu)加熱熔封。熔封后的干(gan)燥(zao)管(guan)可(ke)采用高頻電火花真空(kong)測(ce)定儀測(ce)定真空(kong)度。
 7、保藏
 安瓿管應(ying)低溫避光保藏。
 8、質(zhi)量(liang)檢(jian)查
 冷凍干(gan)燥后抽(chou)取若干(gan)支安瓿管進行(xing)各項指(zhi)標檢查，如存活率、生產能力、形態變異(yi)、雜菌污染等。